書籍介紹
台灣畜殖業每年都會有疫病輪替發生，勞工也已證實會暴露於豬流感病毒。目前國內禽流感尚未有高病原性案例發生，但豬流感則已有新病毒株H1N2及H3N1亞型出現。有必要對豬與人共通的流感發展情形與以監視，減少人豬互傳機率，降低病毒基因交換的機會。流行性感冒病毒屬於正黏液病毒，人體受病毒感染會有病毒血（Viremia）症時期，同時亦可能因病毒複製而有蛋白體的變化，其發生時機是否較早因而可以作為更早的感染指標。研究主要目的為藉由豬流感病毒H1N1感染細胞之蛋白質體研究，作為畜殖場勞工豬流感病毒感染參考，探討可以應用在畜殖場流感防疫的指標。本研究已建立兩種人類呼吸道細胞A549細胞株(ATCC-CCL185)與BEAS-2B細胞株(ATCC-CRL9609)，感染兩種流感病毒A (H1N1與H1N1亞種PR8)的細胞蛋白質體萃取，及BEAS-2B細胞感染H1N1和PR8病毒及對照組細胞。感染兩種流感病毒H1N1和 PR8細胞的免疫螢光染色，證明兩種流感病毒可以感染此兩種細胞株。另外選殖H1N1流感病毒的NS1基因傳染BEAS-2B細胞，免疫螢光染色證明NS1蛋白可以表現，抗體免疫沉澱法，顯示細胞內有約有4~5 bands的蛋白質可能會與NS1蛋白交互作用。勞工血清經除去白蛋白．發現有症狀勞工與抗病毒微粒抗體呈陽性反應，無症狀勞工則有陰性及陽性兩種反應，經電泳及免疫轉印發現與病毒抗體反應band無症狀與有症狀勞工不同。本研究結果證實以蛋白質體學建立之分析方法可以監測養豬場勞工是否暴露到職場發生的豬型流感。建議應繼續建立新型豬流感病毒造成暴露勞工蛋白質體分析監測技術，比較新型豬流感病毒引發勞工及細胞株蛋白體變化異同、以提早養豬場勞工暴露新型豬流感病毒之監測時機及調查高暴露勞工感染機率。並提供勞工預防職場感染新型豬流感參考，補足流感防疫體系的完整性。
目次
摘 要iAbstractii目錄iii圖目錄iv表目錄v第一章 計畫概述1第一節 文獻回顧3第二節 目的4第三節 工作項目4第二章 研究方法5第一節 細胞株感染流感病毒5第二節 勞工檢體資料收集8第三節 勞工血液中特定蛋白質體變化分析9第四節 統計分析10第三章 結果與討論11第一節 細胞株感染流感病毒培養結果11第二節 細胞株感染流感蛋白質電泳分析15第三節 細胞株感染流感蛋白質質譜分析21第四節 勞工檢體分析結果28第四章 結論與建議35誌 謝36參考文獻37圖目錄圖 1 Lung cells morphology11圖2 plaque assay of influenza A virus13圖3 BEAS-2B cells infected with H1N1 virus (anti-virion AB)13圖4 BEAS-2B cells infected with PR8 VIRUS (anti-virion AB)13圖5 A549 Cells infected with H1N1 virus (anti-virion AB)14圖6 A549 cells infected with PR8 virus (anti-virion AB)14圖7 2D-GEL of BEAS-2B infected or non-infected with H1N1 virus16圖8 2D-GEL of BEAS-2B infected or non-infected with PR8 virus17圖9 2D-GEL of A549 cells infected or non-infected with PR8 virus17圖10 BEAS-2B cells transfected with PCMV-flag-H1N1-NS1(anti-FLAG)18圖11 immunoprecipitation of PCMV-flag-h1n1-NS1 in BEAS-2B cells18圖12 MALDI-TOF mass spectra of the tryptic digested, gel-recovered protein bands (left, band 4; right, band3) binding with NS119圖13 畜殖場勞工血清中豬型流行性感冒H1N1病毒蛋白之酵素免疫測定結果。28圖14 畜殖場勞工去白蛋白及免疫球蛋白血清檢體電泳分析結果。29圖15 畜殖場勞工去白蛋白及免疫球蛋白血清檢體電泳免疫轉印分析結果。29表目錄表1 Virus titers12表2 cellular proteins for 2d gel (infected or non-infected with virus)15表3 cellular proteins for 2d gel (infected or non-infected with virus)16表5 identified protein. the mowse score calculated by ms-fit database-searching program and the accession number of the uniprot database are shown for H1N1 NS1-precipitated protein band.20表4 the different protein spots between A549 cells infected or non-infected H1N1 influenza virus (spots for MALDI-TOF)22表6 peptide sequences of the suspected proteins binding with H1N1 NS126表7 identified protein. the MOWSE SCORE calculated by ms-fit database-searching program and the accession number of the uniprot database are shown for unique spots from H1N1-PR8 infected A549 cellular extracts.31表8 MASS SCORE protein spots of virus origin from A549 cells infected with PR832表9 畜殖場勞工H1N1豬型流感病毒暴露危害偵測項目及分析結果33
分類
其他詳細資訊
- 英文題名：Proteomic-based Approaches of Swine Influenza Virus Infection in Swine Farm Employees
- 出版品網址（線上版或試閱版)：連結
- 適用對象：成人(學術性)
- 關鍵詞：豬流行性感冒、勞工、人畜共染疾病、蛋白質體
- 附件：無附件
- 頁/張/片數：39
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